Titre

Transfert d’énergie par fluorescence ou FRET (Förster Resonance Energy Transfer)

Description

Le FRET est une technique qui permet, comme le BRET, d’étudier les interactions moléculaires en mesurant le transfert d’énergie entre deux molécules fluorescentes, appelées donneur et accepteur d’énergie. Ce transfert d’énergie se produit par résonance, sans émission de photon, lorsque les deux molécules sont très proches l’une de l’autre, typiquement à une distance inférieure à 10 nanomètres. Ce transfert d’énergie entraîne une réduction de l’émission de fluorescence du donneur et une augmentation de la fluorescence de l’accepteur.

Le FRET est utilisé pour détecter les interactions entre biomolécules, comme les interactions protéine-protéine ou les changements de conformation moléculaire, en fournissant des informations sur la proximité et la dynamique des molécules dans leur environnement biologique.
Des variantes du FRET ont été développées afin d’améliorer la sensibilité de cette technique. Sur la plateforme, nous utilisons des tests basés sur du FRET en temps-résolu ou HTRF (Homogeneous Time-Resolved FRET).

Dans cette approche, le donneur d’énergie est un fluorophore à longue durée de vie (cryptate de terres rares), ce qui permet de retarder la détection de la fluorescence des molécules fluorescentes jusqu’à ce que les fluorescences parasites (bruit de fond) aient disparues. Cela réduit le bruit de fond et augmente le rapport signal/bruit, permettant des mesures plus précises des interactions moléculaires.

Applications

L’HTRF s’applique au suivi de nombreux évènements cellulaires comme les interactions ligand-récepteur, la quantification de seconds messagers (AMPc, IP1…), la phosphorylation de protéines (ERK1/2…), le recrutement des arrestines ou l’internalisation des récepteurs.